ABI 3730 XL测序

    Applied Biosystems推出的3730系列,代表了进行高通量测序和片段分析的新一代平台,3730XL系统有96道毛细管,整合了自动化装置和光学技术的最新进展,我公司应用Applied Biosystems优化的试剂和专门的软件系统,可以满足客户日益增加的通量需求,也可以满足客户对大规模测序在节省时间、降低成本和操作复杂性方面的要求提供全面服务。
   目前可提供菌液、纯化PCR产物、未纯化PCR产物及质粒等的测序。每天可完成7000份质粒DNA提取、纯化和检测,500份PCR样品的切胶回收纯化及800个测序反应。

 
 
工作原理
    双脱氧链终止法,又称为Sanger法,基本原理如下:DNA模板在DNA聚合酶、引物、四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)存在下进行复制,在四管反应体系中分别按一定的比例引入四种双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3’-OH基团,当ddN-TP掺入链的末端时,该链就会停止延伸。如此每管反应体系中就产生了一系列长度不等的以ddNTP为3’端的DNA片段。

    Applied Biosystems 3730XL测序仪以Sanger法为基础,并用荧光标记代替了同位素标记,从而大大提高了DNA测序的速度和准确性,是基于毛细管电泳和荧光标记技术的新一代DNA测序仪。测序反应产物加入测序仪后,两极间极高的电势差推动着各个荧光DNA片段在凝胶高分子聚合物中从负极向正极泳动,并相互分离,依次通过检测窗口。由激光器发出的极细光束,通过精密的光学系统被导向检测区,在此激光束以与凝胶垂直的角度激发荧光DNA片段。DNA片段上的荧光发色基团吸收了激光束提供的能量而发射出特征波长的荧光。这种代表不同碱基信息的不同颜色荧光经过光栅分光后再投射到CCD摄像机上同步成像,经计算机软件分析后显示测序结果。整个电泳过程结束时在检测区某一点上采集的所有荧光信号就转化为一个以时间为横轴坐标,荧光波长种类和强度为纵轴的信号数据的集合。经测序分析软件对这些原始数据进行分析,最后的测序结果以一种清晰直观的图形显示出来。

应用领域:

(一)DNA常规测序

(二)鸟枪法测序

(三)EST测序 

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